北京恒奧德儀器儀表有限公司
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恒奧德儀器紫外分析儀的原理及其應用
紫外分析儀是熒光術的應用，熒光術是什么呢? 了解下什么是熒光，熒光又作"螢光"，是種光致發(fā)光的冷發(fā)光現(xiàn)象。當某種常溫物質(zhì)經(jīng)某種波長的入射光(通常是紫外線或X射線)照射，吸收光能后入激發(fā)態(tài)，并且立即退激發(fā)并發(fā)出比入射光的的波長長的出射光(通常波長在可見光波段);而且旦停止入射光，發(fā)光現(xiàn)象也隨之立即消失。具有這種性質(zhì)的出射光就被稱之為熒光。 知道了什么是熒光，顧名思義就能想到什么是熒光術。熒光術是某些物質(zhì)受定波長的光激發(fā)后，在短時間內(nèi)(10-8秒)會發(fā)射出波長大于激發(fā)波長的光，這種光稱為熒光。這發(fā)光現(xiàn)象在各方面的應用及有關的方法稱為熒光術(fluorescent technique)。
物質(zhì)經(jīng)過紫外線照射后發(fā)出熒光的現(xiàn)象可分為兩種情況，，如葉綠素、血紅素等經(jīng)紫外線照射后，能發(fā)出紅色的熒光，稱為自發(fā)熒光;二種是誘發(fā)熒光，即物體經(jīng)熒光染料染色后再通過紫外線照射發(fā)出熒光，稱為誘發(fā)熒光。
熒光術在生物化學及分子生物學研究中應用主要包括以下幾個方面:
1、物質(zhì)的定性:不同的熒光物質(zhì)有不同的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜，因此可用熒光行物質(zhì)的鑒別。與吸收光譜法相比，熒光法具有更的選擇性。
2、定量測定:利用在較低濃度下熒光強度與樣品濃度成正比這關系可以定量分析樣品中熒光組分的含量，常用于測定氨基酸、蛋白質(zhì)、核酸的含量。熒光定量測定的個優(yōu)點是靈敏度，例如維生素B2的測定*可達1毫微克/毫升，這優(yōu)點使測定時所需要樣品量大大減少。 這種定量測定方法還可應用于酶催化的反應，只要反應前后有熒光強度的變化，就可用來測定酶的含量及酶反應的速率等。
3、研究生物大分子的物理化學特性及其分子的結(jié)構(gòu)和構(gòu)象:熒光的激發(fā)光譜、發(fā)射光譜、量子產(chǎn)率和熒光壽命等參數(shù)不僅和分子內(nèi)熒光發(fā)色基團的本身結(jié)構(gòu)有關，而且還強烈地依賴于發(fā)色團周圍的環(huán)境，即對周圍環(huán)境十分敏感。利用此特點可通過測定上述有關熒光參數(shù)的變化來研究熒光發(fā)色團所在位的微環(huán)境的特征及其變化。在此研究中，除了利用生物大分子本身具有的熒光發(fā)色團(如色氨酸、酪氨酸、鳥苷酸等，此類熒光稱為內(nèi)源熒光)以外，可將些特殊的熒光染料分子共價地結(jié)合或吸附在生物大分子的某位，通過測定該染料分子的熒光特性變化來研究生物大分子，這種染料分子被稱為"熒光探針"，它們發(fā)出的熒光般稱為外源熒光。熒光探針的應用，大大地開拓了熒光術在分子生物學中的應用范圍。
4、利用熒光壽命、量子產(chǎn)率等參數(shù)可以研究生物大分子中的能量轉(zhuǎn)移現(xiàn)象:通過該現(xiàn)象的研究，可以獲得生物大分子內(nèi)的許多信息。
以往人們常用熒光偏振做標來研究生物大分子動力學。人們趨于用熒光偏振隨時間的衰減來研究這些問題。在這種方法中，激發(fā)光不是連續(xù)的面偏振光，而是偏振的光脈沖，因此測得的F∥和F是在兩個不同方向上偏振的熒光隨時間的衰減，它既和熒光壽命τ有關，又與分子在溶液中的運動有關，因此常表示為F∥(t)和F⊥(t)。由它們可得相當重要的物理量--各向異性參數(shù)A(t)。由A(t)可推測生物大分子的形狀、分子轉(zhuǎn)動弛豫時間(即從個定向的狀態(tài)到個無定向狀態(tài)所要的時間)，而可以推知生物大分子的大小、分子在溶液中的轉(zhuǎn)動角度和時間之間的函數(shù)關系。由這些結(jié)果可以研究分子之間的相互作用、分子間結(jié)合的緊密程度、蛋白質(zhì)、核酸分子的解聚程度等等。
