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恒奧德儀器水質活性氧檢測儀操作步驟注意事項

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恒奧德儀器活性氧檢測儀操作步驟注意事項

 

 

基于熒光探針技術,通過檢測細胞內活性氧(ROS)水平評估氧化應激狀態。常用熒光探針為 DCFH-DA 2',7'-二氯熒光黃雙乙酸鹽),其原理如下:

檢測原理

DCFH-DA本身無熒光,可自由穿透細胞膜。進入細胞后被酯酶水解生成 DCFH DCFH因無法通透細胞膜而積聚于細胞內。細胞內ROS可氧化無熒光的DCFH生成有熒光的 DCF (二氯熒光素),熒光強度與ROS水平成正比。 ?

操作步驟

?探針裝載?

短時間刺激(2小時內)的細胞:先裝載探針再刺激;長時間刺激(6小時以上)的細胞:先刺激再裝載探針。 ?

貼壁細胞采用原位裝載(直接加入探針),懸浮細胞需收集后裝載。 ?

?熒光檢測?

使用熒光顯微鏡、流式細胞儀或激光共聚焦顯微鏡,在激發波長480nm和發射波長525nm下檢測DCF熒光強度。 ?

注意事項

裝載探針后需洗凈殘留未進入細胞的探針,避免背景干擾。 ?

盡量縮短探針裝載至檢測的時間間隔,減少誤差


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